راحله شهبازی؛ رضا طلایی حسنلویی؛ مسعود نادرپور؛ علی مهرور؛ اکبر دیزجی؛ فاطمه فتوحی
چکیده
استفاده از روش‌های مبتنی بر اسیدنوکلئیک در شناسایی ویروس‌ها به دلیل ساختار کوچک ژنومی آن‌ها و تفاوت‌های جزئی در سطح نوکلئوتید بین جدایه‌ها یا استرین‌ها، از اهمیت زیادی برخوردار است. در پژوهش حاضر، لاروهای مرده و/یا بیمار از مزارع گوجه‌فرنگی مناطق مختلف جغرافیایی ایران جمع‌آوری و برای آلودگی باکولوویروسیHelicoverpa armigera Single nucleopolyhedrovirus ...
بیشتر
استفاده از روش‌های مبتنی بر اسیدنوکلئیک در شناسایی ویروس‌ها به دلیل ساختار کوچک ژنومی آن‌ها و تفاوت‌های جزئی در سطح نوکلئوتید بین جدایه‌ها یا استرین‌ها، از اهمیت زیادی برخوردار است. در پژوهش حاضر، لاروهای مرده و/یا بیمار از مزارع گوجه‌فرنگی مناطق مختلف جغرافیایی ایران جمع‌آوری و برای آلودگی باکولوویروسیHelicoverpa armigera Single nucleopolyhedrovirus (HearSNPV) با روش بهینه‌سازی شده بر اساس سدیم دودسیل سولفات برای استخراج OBs، بررسی شدند. واکنش زنجیره‌ای پلی‌مراز (PCR) با استفاده از دو جفت آغازگر اختصاصی (Polh-a, Polh-b) طراحی شده بر اساس ناحیه حفاظت شده ژن پلی‌هدرین(Polh) برای 26 جدایه ثبت شده از ویروس Hear/H. zea-SNPV انجام یافت. آلودگی به HearSNPVبا تکثیر باندهای مونومورفیک 370 و 790 نوکلئوتیدی در 28 لارو تایید شد. همسانه‌سازی و تعیین توالی نوکلئوتیدی باندهای تکثیر شده، تعلق آن‌ها به ژن Polhویروس چندوجهی‌هسته‌ای گونه‌هایarmigera H. و H. zea با شباهت بیش از 6/99 درصد را نشان داد. تجزیه و تحلیل تبارزایی جدایه‌های ایرانی HearSNPV همراه با سایر جدایه‌های ثبت شده از این ویروس در دنیا، جدایه‌های ایرانی را در گروه II آلفاباکولوویروس‌ها طبقه‌بندی و کارایی بیشتر روش توسعه داده شده را اثبات کرد. پژوهش حاضر اولین گزارش از معرفی و شناسایی مولکولی جدایه‌های ایرانی HearSNPV با به کارگیری تکنینک PCR و DNA ویروس از لاروهای با هویت نامشخص بیمارگر، می‌باشد. با توجه به حصول اطمینان از موثر و مفید بودن این روش در غربال‌گری سریع لاروهای حشرات از نظر آلودگی به این ویروس و بررسی تبارزایش، بهره‌مندی از آن در پژوهش‌های آتی توصیه می‌گردد.
مرضیه قباخلو؛ اکبر دیزجی؛ احد یامچی؛ حشمت رحیمیان
چکیده
ویروئید اگزوکورتیس مرکبات Citrus exocortis viroid (CEVd)، عامل یکی از بیماری‌های مهم اقتصادی به نام اگزوکورتیس مرکبات است. در این پژوهش، چندشکلی توالی نوکلئوتیدی و ساختار جمعیت CEVd در دو میزبان متحمل و حساس (به ترتیب، نارنج (Citrus aurantium L.) و سیترنج ((Poncirus trifoliata (L.) Raf. × C. sinensis (L.)) بررسی شد. رونوشت تمام طول برآمده از جدایۀ ایرانی CEVd-S1 در شرایط درون ...
بیشتر
ویروئید اگزوکورتیس مرکبات Citrus exocortis viroid (CEVd)، عامل یکی از بیماری‌های مهم اقتصادی به نام اگزوکورتیس مرکبات است. در این پژوهش، چندشکلی توالی نوکلئوتیدی و ساختار جمعیت CEVd در دو میزبان متحمل و حساس (به ترتیب، نارنج (Citrus aurantium L.) و سیترنج ((Poncirus trifoliata (L.) Raf. × C. sinensis (L.)) بررسی شد. رونوشت تمام طول برآمده از جدایۀ ایرانی CEVd-S1 در شرایط درون شیشهای جهت آلودهسازی مکانیکی نهالها استفاده شد. تنوع ژنتیکی جمعیتهای CEVd با به‌کارگیری چندشکلی فضایی تکرشتهای (SSCP) و توالییابی نوکلئوتیدی تعیین شد. بررسی ژنوم ویروئید همسانهسازیشده در این دو میزبان، تأثیر گونۀ میزبان بر تغییرهای ژنتیکی جمعیت برآمده از یک جدایۀ CEVd را آشکار کرد. نتیجههای این پژوهش نشان دادند که ساختار جمعیتی ویروئید اگزوکورتیس مرکبات در دو میزبان حساس و متحمل متفاوت و در میزبان متحمل متنوعتر از میزبان حساس است. بررسی ساختار ثانویۀ ترمودینامیکی واریانتها نشان داد که تغییرهای شناساییشده در ژنوم ویروئید در این پژوهش تأثیر چشمگیری در ساختار کلی میلهای شکل ویروئید نداشته است.
شیرین پریزاد؛ اکبر دیزجی؛ مینا کوهی حبیبی؛ غلامحسین مصاحبی محمدی؛ سیامک کلانتری؛ فاطمه ایزدپناه
چکیده
پس از نمونه‌برداری تصادفی از برگ‌ها و بنه‌های گیاه زعفران (Crocus sativus L.) از شش استان کشور در سالهای 1390 تا 1394، شمار 641 از 890 نمونه با آنتی‌بادیهای عمومی جنس پوتیویروس و همان‌طور با آنتیبادی اختصاصی ویروس موزاییک معمولی لوبیا(BCMV) در آزمون الایزا واکنش مثبت نشان داد. وزن مولکولی پروتئین پوششی (CP) چند جدایة مورد بررسی پوتیویروس ...
بیشتر
پس از نمونه‌برداری تصادفی از برگ‌ها و بنه‌های گیاه زعفران (Crocus sativus L.) از شش استان کشور در سالهای 1390 تا 1394، شمار 641 از 890 نمونه با آنتی‌بادیهای عمومی جنس پوتیویروس و همان‌طور با آنتیبادی اختصاصی ویروس موزاییک معمولی لوبیا(BCMV) در آزمون الایزا واکنش مثبت نشان داد. وزن مولکولی پروتئین پوششی (CP) چند جدایة مورد بررسی پوتیویروس زعفران با استفاده از آزمون وسترن بلات 35 کیلو دالتون محاسبه شد. پس از استخراج آر.ان.ا کل از گیاهان آلوده، سه قطعه منقطع از ژنوم (مربوط به انتهای '3 ژنوم و بخشی از نواحی CI و HC-Pro) تکثیر شد. پروتئین پوششی (CP) پوتیویروس زعفران بر پایة توالی نوکلئوتیدی بیشترین یکسانی را (74 درصد) با Ceratobium mosaic virus و Telosma mosaic virus و بر پایة توالی ترجمة اسیدآمینه‌ای بیشترین یکسانی را (8/78 درصد) با Bean common mosaic necrosis virus داشت. به‌رغم رابطة سرم‌شناختی (سرولوژیکی) بالای این پوتیویروس با BCMV و خویشاوندی تبارزایی (فیلوژنتیکی) با زیرگروه BCMV بر پایة ناحیة CP، میزان یکسانی توالی نوکلئوتیدی و ترجمه اسید آمینهای پروتئین پوششی آن کمتر از آستانة تعیین حدود و گسترة گونه در جنس پوتیویروس است. لذا به‌احتمال‌زیاد پوتیویروس آلوده‌کنندة زعفران گونة جدیدی از جنس پوتیویروس بوده که اظهارنظر قطعی مستلزم تعیین توالی کل ژنوم آن است.
هادی خاطری؛ غلامحسین مصاحبی‌محمدی؛ اشتفان وینتر؛ مینا کوهی‌حبیبی؛ اکبر دیزجی
چکیده
ویروس وای سیب‌زمینی (Potato virus Y, PVY) از مهم‌ترین عوامل خسارت‌زا در مزارع توتون مناطق مختلف استان‌های گلستان، مازندران و گیلان است. با توجه به بی‌تأثیری حشره‌کش‌ها در کاهش آلودگی به PVY، شکسته شدن منابع طبیعی مقاومت توسط سویه‌های خاص و مشکلات روش‌های سنتی اصلاحی، به‌کارگیری روش‌های جایگزین ایجاد مقاومت به PVY در توتون با به‌کارگیری ...
بیشتر
ویروس وای سیب‌زمینی (Potato virus Y, PVY) از مهم‌ترین عوامل خسارت‌زا در مزارع توتون مناطق مختلف استان‌های گلستان، مازندران و گیلان است. با توجه به بی‌تأثیری حشره‌کش‌ها در کاهش آلودگی به PVY، شکسته شدن منابع طبیعی مقاومت توسط سویه‌های خاص و مشکلات روش‌های سنتی اصلاحی، به‌کارگیری روش‌های جایگزین ایجاد مقاومت به PVY در توتون با به‌کارگیری مقاومت مشتق‌شده از بیمارگر می‌تواند راهکاری برای کاهش خسارت در نظر گرفته شود. در این پژوهش گیاهان توتون تراژنی تولید شدند که در برابر طیف گسترده‌ای از جدایه‌های PVY از سویه‌های مختلف این ویروس مقاوم‌اند. ناحیه‌ای به اندازۀ ۴۷۲ جفت‌باز از ژنوم یک جدایۀ ایرانی PVY شامل توالی نوکلئوتیدی بخش‌هایی از CP و 3'UTR به منظور تهیۀ یک سازۀ سنجاق‌سری برای مقاومت به PVY به‌کار گرفته شد و تراژن‌سازی توتون رقم Wisconsin 38 با این سازه به کمک اگروباکتریوم انجام گرفت. ۶۱ درصد از گیاهان تراژن T0 حاصل به PVY مقاوم بودند و انتقال مقاومت به نسل بعد در 9 لاین مختلف با استفاده از روش داس الایزا تأیید شد. یکی از این لاین‌ها با ۱۲ جدایۀ مختلف PVY شامل چهار جدایۀ ایرانی و هشت جدایه از کشورهای دیگر تحت آزمایش قرار گرفت و مصونیت آن بر اساس عدم ظهور علائم و نتایج آزمون‌‌های داس الایزا و RT-PCR به تأیید رسید. این پژوهش نشان داد که سازۀ سنجاق‌سری به‌کاررفته دارای کارایی بسیار زیادی برای ایجاد توتون تراژن مصون در مقابل سویه‌های مختلف PVY بوده است.
پریسا شریفی نظام آباد؛ مینا کوهی حبیبی؛ اکبر دیزجی؛ سیامک کلانتری؛ معصومه رنجبر اقدم
چکیده
در سالهای 1388-1387، تعداد 154 پداژه از مراکز توزیع پداژههای گلایل در کرج جمع‌آوری و پس از کشت، بررسی بافت برگ بوتهها با آزمونDAS-ELISA حاکی از آلودگی 02/74 درصد بوتهها به ویروس موزاییک زرد لوبیا (Bean yellow mosaic virus, BYMV) بود. پس از خالصسازی بیولوژیکی و تکثیر جدایهای به نام BYMV-GPK، دامنه میزبانی آن تعیین شد. وزن مولکولی پروتئین پوششی ...
بیشتر
در سالهای 1388-1387، تعداد 154 پداژه از مراکز توزیع پداژههای گلایل در کرج جمع‌آوری و پس از کشت، بررسی بافت برگ بوتهها با آزمونDAS-ELISA حاکی از آلودگی 02/74 درصد بوتهها به ویروس موزاییک زرد لوبیا (Bean yellow mosaic virus, BYMV) بود. پس از خالصسازی بیولوژیکی و تکثیر جدایهای به نام BYMV-GPK، دامنه میزبانی آن تعیین شد. وزن مولکولی پروتئین پوششی جدایه با استفاده از روش SDS- PAGE، 34 کیلودالتون محاسبه گردید و از طریق آزمون وسترن بلات تأیید شد. بررسی حساسیت آزمون‌‌های سرولوژیکی ایمنیسنجی اثر بافت (TPIA) وDAS-ELISA در ردیابی BYMV در بافتهای برگ و پداژهها نشان داد هر دو روش ویروس را بهآسانی در بافت برگ بوتههای گلایل آلوده ردیابی کردند اما هیچیک از این دو روش قادر به ردیابی ویروس در بافت پداژههای آلوده نبود. دو بخش انتهای ´3 و ناحیه HC-Pro ژنوم این جدایه، بهترتیب به اندازۀ 600 و 1100 جفت باز، با روش RT-PCR تکثیر گردید. در تحلیل فیلوژنتیکی براساس ترادف نوکلئوتیدی و ترجمۀ اسید آمینهای این نواحی، جدایه‌های مختلف ویروس تفکیک شد و جدایة GPK در کنار جدایه‌های گلایل یا شبدر قرار گرفت.
