مینو سجادیان؛ وحید حسینی نوه؛ خلیل طالبی؛ مریم زمانی
چکیده
کاربرد گستردۀ ترکیب‌های آلی فسفرۀ منجر به بروز اثر زیان‌آور زیست‌محیطی بسیاری شده است. استفاده از میکروارگانیسمها در پالایش و اندازه‌گیری این ترکیب‌های ناگوار به‌عنوان یک رویکرد دوستدار محیطزیست و مناسب شناخته شده است. آنزیم ارگانوفسفروس هیدرولاز از آنزیم‌های هیدرولیزکنندۀ فسفوتریاستری است که در برخی میکروارگانیسمهای ...
بیشتر
کاربرد گستردۀ ترکیب‌های آلی فسفرۀ منجر به بروز اثر زیان‌آور زیست‌محیطی بسیاری شده است. استفاده از میکروارگانیسمها در پالایش و اندازه‌گیری این ترکیب‌های ناگوار به‌عنوان یک رویکرد دوستدار محیطزیست و مناسب شناخته شده است. آنزیم ارگانوفسفروس هیدرولاز از آنزیم‌های هیدرولیزکنندۀ فسفوتریاستری است که در برخی میکروارگانیسمهای خاک به‌ویژه Flavobacterium sp.شناسایی شده و قادر به هیدرولیز تعدادی از ترکیب‌های فسفرۀ آلی است. در این پژوهش بهینه‌سازی کدون‌های توالی رمزگذار این پروتئین برای بیان در باکتری Escherichia coli انجام شد و سپس همراه با پروموتر lac، در وکتور پروموتر-پروب pTH1705 به‌صورت ادغام الگوبرداری کلون شد و ترانسفورماسیون در دو سویۀ باکتری E. coli انجام گرفت. محیط کشت معدنی M9 حاوی غلظت 10و 50 میلیگرم در لیتر دیازینون، برای سنجش عملکرد باکتری تراریخت بیان‌کنندۀ ژن opd (به‌صورت in trans) استفاده شد. بررسی منحنی رشد استرین E. coli V103 نشان داد، رشد باکتری در غلظت 50 میلیگرم در لیتر دیازینون تا حد زیادی تحت تأثیر (وجود آفتکش) قرار میگیرد درحالی‌که در غلظت 10 میلیگرم در لیتر دیازینون این تأثیر کمتر است. نتایج حاصل از کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا به‌عنوان یک روش استاندارد نشان داد، غلظت دیازینون در محیط کشت باکتری، در چهار استرین V100، V101، V102 و V103 پس از 24 ساعت از 10 میلیگرم در لیتر به ترتیب به 38/6، 19/7، 09/7 و 74/5 میلیگرم در لیتر کاهش یافت. این نتایج بیانگر انتقال موفق و نیز بیان ژن مورد نظر در باکتری است و این باکتری نوترکیب مهندسی‌شده توانایی تجزیۀ ترکیب‌های فسفره را دارد.
