c3518cb17d976b8

نویسندگان

چکیده

بیماری آتشک با عامل باکتریایی Erwinia amylovora از بیماری‌های مهم میوه‌های دانه‌دار محسوب می‌شود. این بیماری طی سال‌های گذشته خسارت‌های هنگفتی به باغ‌های میوه دانه‌دار ایران تحمیل نموده است. استفاده از روش‌های دقیق و قابل اطمینان جهت شناسایی و ردیابی به موقع بیمارگر، به کنترل زود هنگام و جلوگیری از گسترش بیماری و حذف درختان آلوده کمک می‌نماید. در این تحقیق دو آنتی‌سرم پلی‌کلونال اختصاصی تهیه شده و برای ردیابی سلول‌های باکتری E. amylovora (Ea) در آزمون‌های نشت در آگار و DIBA ‌مورد استفاده قرار گرفتند. آزمون دیبا قادر به ردیابی7‌‌10×1 سلول باکتری در هر میلی‌لیتر کشت خالص و نیز عصاره آلوده بود. با غنی‌سازی در محیط مایع کینگ بی، سطح حساسیت دیبا به10 سلول افزایش یافت. در این بررسی کارایی روش‌های سرولوژیکی با برخی از روش‌های مبتنی بر PCRکه جهت شناسایی این باکتری منتشر شده‌اند نیز مقایسه گردید. به این منظور قطعه‌ای یک کیلو بازی از پلازمید pEA29 بنامpstI با استفاده از آغازگرهای A وB در روش PCR تکثیر گردید. سطوح حساسیت این روش در آب و عصاره گیاهی به ترتیب 104×2 و 106×2 سلول در مخلوط واکنش بود. سه روش ذکر شده قادر به شناسایی استرین‌های متعلق به میزبان‌ها و مناطق مختلف کشور بوده و جهت شناسایی Ea در مقایسه با سایر جنس‌های باکتریایی اختصاصی عمل نمودند. در Nested-PCR با استفاده از آغازگرهای AJ75 و AJ76 یک قطعه 800 جفت بازی تکثیر گردید. این روش بسیار حساس توانست در مخلوط واکنش تا یک سلول باکتریایی را در آب و تا 100 سلول را در عصاره گیاهی ردیابی نماید.

کلیدواژه‌ها

عنوان مقاله [English]

A Study of the Efficiency of some Serological and PCR -Based Methods for the Identification and Detection of Erwinia amylovora, the Causal Agent of Pome Trees Fire Blight

نویسندگان [English]

  • nahid moaref zadeh
  • mojtaba mohammadi
  • abbas sharifi tehrani
  • zahra zakeri

چکیده [English]

Fire blight, a bacterial disease caused by Erwinia amylovora (Burr.) Winslow et al. 1920 is considered as a serious disease on pome fruits. During recent years, this disease has caused serious damages to the fruit growing industry in Iran. Precise and reliable methods for identification and detection of the pathogen can help in its early control, prevent the disease spread and help eliminate the infected trees in orchards and particularly young trees in the nurseries. In this study, two specific polyclonal antisera were developed and used in double diffusion in agar test and Dot Immunobinding Assay (DIBA) to detect E. amylovora (Ea) cells. As many as 1×107 cells per ml from pure culture and as well from infected tissues were detected through DIBA. The sensitivity level was increased to as low as 10 cells using the bacterial enrichment step. The efficiency of serological methods was compared with some published PCR based identification methods, too, in which, a single 1kb DNA fragment (pstI) of pEA29 plasmid was amplified in Polymerase Chain Reaction (PCR) by using A and B primer pair. The sensitivity levels of this method in water and tissue extract were 2×104 vs 2×106 CFU/reaction mixture, respectively. The three mentioned methods were able to identify Ea strains representing various hosts and regions of the country and were specific for Ea, in contrast with other bacterial genera. In Nested-PCR, AJ75 and AJ76 specific primers were used to amplify a single 800- bp fragment. In each reaction mixture, this highly sensitive method could detect as few as one and as many as 100 Ea cells in water and in tissue extract, respectively.

کلیدواژه‌ها [English]

  • Detection.
  • DIBA
  • Erwinia amylovora
  • Nested-PCR
  • serology