شناسایی مولکولی چهار ویروس مهم جنس نپوویروس از تاکستان‌های استان زنجان

مرادی, رقیه; کولیوند, داود; عینی گندمانی, امید; حاجی زاده, محمد

doi:10.22059/ijpps.2018.246930.1006816

شناسایی مولکولی چهار ویروس مهم جنس نپوویروس از تاکستان‌های استان زنجان

نوع مقاله : مقاله پژوهشی

نویسندگان

¹ دانشجوی سابق کارشناسی ارشد، گروه گیاهپزشکی، دانشکدۀ کشاورزی، دانشگان زنجان

² استادیار، گروه گیاهپزشکی، دانشکدۀ کشاورزی، دانشگان زنجان

³ استادیار، گروه گیاهپزشکی، دانشکده کشاورزی، دانشگاه کردستان. سنندج

10.22059/ijpps.2018.246930.1006816

چکیده

بهمنظور بررسی وضعیت ویروسهای مهم متعلق به جنس نپوویروس از تاکستانهای استان زنجان، نمونه‌برداری در سالهای زراعی 95-۹4 به‌صورت انتخابی از گیاهان دارای نشانه‌های مشکوک به بیماری‌های ویروسی انجام و درمجموع 168 نمونۀ گیاهی دارای نشانه و بدون نشانه گرد‌آوری شد. استخراج آر.ان.ای کل از بافتهای برگی و آوندی 57 نمونه بر اساس نشانه‌ها و مناطق نمونه‌برداری شده انجام گرفت و cDNA آنها ساخته‌ شد و سپس، آزمون پیسیآر توسط آغازگرهای اختصاصی برای تکثیر (افزونش) بخشی از ژنگان (ژنوم) نپوویروس‌های موزاییک آرابیس (Arabis mosaic virus, ArMV)، بدشکلی انگور (Grapevine deformation virus, GDeV)، برگ بادبزنی انگور (Grapevine fanleaf virus, GFLV) و لکۀ حلقوی گوجهفرنگی (Tomato ring spot virus, ToRSV) انجام گرفت. نتایج واکنش زنجیرهای پلمیراز گویای تکثیر قطعه‌های مورد انتظار از ویروس‌های ArMV، GDeV، GFLV و ToRSV به ترتیب از 7/15، 7/15، 5/10 و 14 درصد نمونهها بود. پس از تعیین توالی، همردیف‌سازی ترادف نوکئوتیدی قطعه‌های تکثیرشده با دیگر توالی‌های موجود در بانک ژن و تحلیل تبارزائی توسط برنامۀ MEGA6، با روش Neighbor-Joining انجام شد. بررسی رابطه‌های تبارزائی بر اساس توالیهای نوکلئوتیدی نشان داد، جدایههای ردیابیشده در این تحقیق با جدایههایی از کشورهای مختلف همگروه‌اند که در بیشتر موارد ارتباط جغرافیایی بین جدایه‌های ردیابی شده و دیگر جدایه‌ها را نشان می‌دهد. این نخستین تحقیق جامع بر اساس دادههای مولکولی از نپوویروسهای مهم انگور در استان زنجان و نخستین گزارش ویروس بدشکلی انگور از این منطقه است.

کلیدواژه‌ها

20.1001.1.20084781.1397.49.1.10.5

عنوان مقاله [English]

Molecular Identification of four important nepovirus from vineyards of Zanjan province

نویسندگان [English]

Roghayeh Moradi ¹
Davoud Koolivand ²
Omid Eini ²
Mohammad Hajizadeh ³

¹ Former M. Sc. Student, Department of Plant Pathology, Faculty of Agriculture, University of Zanjan, Zanjan, Iran

² Assistant Professor, Department of Plant Pathology, Faculty of Agriculture, University of Zanjan, Zanjan, Iran

³ Assistant Professor, Department of Plant Protection, Faculty of Agriculture, University of Kurdistan, Sannadej, Iran

چکیده [English]

To determine incidence of nepoviruses in vineyards of zanjan province, 168 symptomatic and non-symptomatic samples were collected during season growing 2014-2015. Total RNA was extracted from the 57 leaves and green shoots of selected samples and then cDNAs were synthesized. Genomic segment of Arabis mosaic virus (ArMV), Grapevine deformation virus (GDeV), Grapevine fan leaf virus (GFLV) and Tomato ring spot virus (ToRSV) was amplified by polymerase chain reaction (PCR) using specific primers. The result revealed that the expected bands were amplified at 15.7, 15.7, 10.5 and 14% of different samples belong to ArMV, GDeV, GFLV and ToRSV, respectively. Following sequencing and multiple alignment of nucleotide sequence of amplified fragments with isolates that retrieved from NCBI. Phylogenetic tree was created by MEGA6 software using Neighbour-Joining method. The result revealed that the Iranian isolates were grouped with reported isolates from different regions around the world based on geographical. This is the first comprehensive study based on molecular methods to determine grapevine nepoviruses in Zanjan province and the first report of GDeV from Zanjna based on our knowledge.

کلیدواژه‌ها [English]

Arabis mosaic virus
grapevine deformation virus
grapevine fanleaf virus
RT-PCR
tomato ringspot virus

مراجع

Anonumous, Ministry of Agriculture. (2015). Retrieved Novembre, 2015. From: http://www.maj.ir. (in Farsi)
Cigsar, I., Digiaro, M., Gokalp, K., Ghanem-Sabanadzovic, N. A., De Stradis, A., Boscia, D., Martell, G. (2003). Grapevine deformation virus, a novel nepovirus from Turkey. Journal of Plant Pathology, 85, 183-191.
Cseh, E., Takács, A., Kocsis, L. & Gáborjányi, R. (2012). General properties of grapevine viruses occurring in Hungary. Journal of Central European Agriculture, 13, 0-0.
Dolati-Baneh, H., Mohammadi, S. A., Abdollahi-Mandoulakani, B. & Rahmanpour, S. (2014). Association analysis for morphological traits in grapevine using SSR and AFLP markers. Journal of Agriculture Biotechnology, 6, 45-60.
Dostsadigh, H., Rakhshanderoo, F. & Shamsbakhsh M. (2011). Distribution of Arabis Mosaic Virus (ArMV) on Grapevines and Roses in Western and Eastern Azarbaijan Provinces. Journal of Plant Protection, 34, 59-74. (in Farsi)
Golnaraghi, A., Shahraeen, N., Pourrahim, R., Farzadfar, S. & Ghasemi, A. (2004). Occurrence and relative incidence of viruses infecting soybeans in Iran. Plant Disease 88, 1069-1074.
Gooding, G. V. (1963). Purification and serology of a virus associated with the Grape yellow vein disease. Phytopathology 53.
Goszczynski, D., Du Preez, J. & Burger, J. (2008). Molecular divergence of Grapevine virus A (GVA) variants associated with Shiraz disease in South Africa. Virus Research, 138, 105-110.
Hajizadeh, M., Torchetti, E., Sokhandan-Bashir, N., Navarro, B., Doulati-Baneh, H., Martelli, G. & Hewitt, W. B. (1954). Some virus and virus-like diseases of grapevines. Bulletin Department of Agriculture, California 43, 47-64.
Izadpanah, K., Zaki-Aghl, M., Zhang, Y., Daubert, S. & Rowhani, A. (2003). Bermuda grass as a potential reservoir host for Grapevine fanleaf virus. Plant Disease, 87, 1179-1182.
Kimura, S. & Sinha, N. (2008). Tomato (Solanum lycopersicum): a model fruit-bearing crop. Cold Spring Harbor Protocols, 105.
Massumi, H., Shaabanian, M., Pour, A. H., Heydarnejad, J. & Rahimian, H. (2009). Incidence of viruses infecting tomato and their natural hosts in the southeast and central regions of Iran. Plant Disease, 93, 67-72.
Mojtahedi, H., Sturhan, D., Akhiani, A. & Barooti, S. (1980). Xiphinema species in Iranian vineyards. Nematology of Mediterranean, 8, 165-170.
Nakaune, R. & Nakano, M. (2006). Efficient methods for sample processing and cDNA synthesis by RT-PCR for the detection of grapevine viruses and viroids. Journal of Virological Methods, 134, 244-249.
Osman, F., Hodzic, E., Omanska-Klusek, A., Olineka, T. & Rowhani, A. (2013). Development and validation of a multiplex quantitative PCR assay for the rapid detection of Grapevine virus A, B and D. Journal of Virological Methods, 194, 138-145.
Parvizi, R. (1989). Occurrence of grapevine fanleaf disease in vineyards of Ourmia. Proceedings of the 9th Iranian Plant Protection Congress, Mashhad, Iran.
Pourrahim, R., Ahoonmanesh, A., Farzadfar, S., Rakhshandehro, F. & Golnaraghi, A. (2004). Occurrence of Arabis mosaic virus and Grapevine leaf roll associated virus-3 on Grapevines in Iran. Plant Disease, 88, 424-424.
Rakhshandehroo, F., Pourrahim, R., Zamani Zadeh, H., Rezaee, S. & Mohammadi, M. (2005). Incidence and distribution of viruses infecting Iranian vineyards. Journal of Phytopathology, 153, 480-484.
Rakhshandehroo, F., Zamani Zadeh, H., Modarresi, A. & Hajmansoor, S. (2006). Occurrence of Prunus necrotic ringspot virus and Arabis mosaic virus on Rose in Iran. Plant Disease, 90, 975-975.
Rowhani, A., Chay, C., Golino, D. & Falk, B. (1993). Development of a polymerase chain reaction technique for the detection of grapevine fanleaf virus in grapevine tissue. Phytopathology, 83, 749-758.
Sanfaçon, H., Wellink, J., Le Gall, O., Karasev, A., Van der Vlugt, R. & Wetzel, T. (2009). Secoviridae: a proposed family of plant viruses within the order Picornavirales that combines the families Sequiviridae and Comoviridae, the unassigned genera Cheravirus and Sadwavirus, and the proposed genus Torradovirus. Archives of Virology, 154, 899-907.
Smith, K. M. & Markham, R. (1944). Two new viruses affecting Tobacco and other plants. Phytopathology, 34.
Sokhandan Bashir, N., Nikkhah, S. & Hajizadeh, M. (2007a). Distinct phylogenetic positions of Grapevine fanleaf virus isolates from Iran based on the movement protein gene. Journal of General Plant Pathology, 73, 209-215.
Sokhandan, N., Pashaei, A. & Doulati-Baneh, H. (2011). Characterization of the full length coat protein gene of Iranian Grapevine fanleaf virus isolates, genetic variation and phylogenetic analysis. Iranian Journal of Biotechnology, 9, 213-221.
Sokhandan Bashir, N. S., Zarghani, S. N. & Hejazi, M. S. (2007b). Diversity of Grapevine fanleaf virus isolates from Iran. Virus Research, 128, 144-148.
Terral, J.-F., Tabard, E., Bouby, L., Ivorra, S., Pastor, T., Figueiral, I., Picq, S., Chevance, J.-B., Jung, C. & Fabre, L. (2009). Evolution and history of grapevine (Vitis vinifera) under domestication: new morphometric perspectives to understand seed domestication syndrome and reveal origins of ancient European cultivars. Annals of Botany, 105, 443-455.
Vigne, E., Bergdoll, M., Guyader, S. & Fuchs, M. (2004). Population structure and genetic diversity within Grapevine fanleaf virus isolates from a naturally infected vineyard: Evidence for mixed infection and recombination. Journal of General Virology, 85, 2435-2445.